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细胞毒活性测定法
更新时间:2016-12-16   点击次数:1396次

 细胞毒活性测定法
很多细胞因子针对转化的细胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制细胞生长的活性。常用的检测细胞增殖的方法有3H-TdR掺人法、比色法、染色法和直接计数法等。检测细胞因子促生长活性或抑制生长活性是将不同稀释度的待测样品或细胞因子标准品与培养的细胞株共同培养一定时间,然后检测增殖的细胞数。此外,测定代谢产物荧光强度的方法也可检测增殖细胞数,如ATP法和cAMP法。检测细胞因子溶细胞八田胞毒活性或抑制生长活性是将不同稀释度的待测样品或细胞因子标准品与培养的细胞株共同培养一定时间,然后检测存活的靶细胞数,并与对照比较求得溶细胞或抑制细胞生长的百分率,或以OD值对样品稀释度作图,绘制标准品的剂量反应曲线,从曲线上求得相应的待测样品的含量。生物学活性检测法所用的靶细胞可直接从组织中分离,如骨髓细胞的集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验,或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为靶细胞。细胞因子还能诱导靶细胞表达某些表面分子或分泌一些蛋白质,可以用荧光素标记抗体检测表达相应分子的细胞数,或用特定方法测定细胞分泌的蛋白质,间接了解细胞因子的活性。其测定方法可分为促进细胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性测定法、集落形成法、趋化作用测定法及细胞因子诱导产物测定法等。前者的增殖细胞数与细胞因子的含量成正比,而后者的增殖细胞数与细胞因子的含量成反比。其原理是根据细胞因子特定的生物学活性,应用相应的指示系统,如各种依赖性细胞株或靶细胞,同时与标准品对比测定,从而得知样品中细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/mL)表示。
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